(Cytometria przepływowa, FCM) to analizator komórek, który mierzy intensywność fluorescencji barwionych markerów komórkowych. Jest to technologia high-tech opracowana na podstawie analizy i sortowania pojedynczych komórek. Może szybko mierzyć i klasyfikować rozmiar, strukturę wewnętrzną, DNA, RNA, białka, antygeny i inne właściwości fizyczne lub chemiczne komórek i może opierać się na zbiorze tych klasyfikacji.
Cytometr przepływowy składa się głównie z następujących pięciu części:
1 Komora przepływowa i układ przepływowy
2 Źródło światła laserowego i układ kształtowania wiązki
3 Układ optyczny
4 Elektronika, system przechowywania, wyświetlania i analizy
5-komórkowy system sortowania
Wśród nich wzbudzenie laserowe w źródle światła laserowego i układzie formowania wiązki jest głównym pomiarem sygnałów fluorescencji w cytometrii przepływowej. Intensywność światła wzbudzającego i czas ekspozycji są powiązane z intensywnością sygnału fluorescencji. Laser jest spójnym źródłem światła, które może zapewnić oświetlenie o pojedynczej długości fali, wysokiej intensywności i wysokiej stabilności. Jest to idealne źródło światła wzbudzającego, aby spełnić te wymagania.
Pomiędzy źródłem lasera a komorą przepływową znajdują się dwie cylindryczne soczewki. Soczewki te skupiają wiązkę lasera o przekroju kołowym emitowaną ze źródła lasera w wiązkę eliptyczną o mniejszym przekroju (22 μm × 66 μm). Energia lasera w tej eliptycznej wiązce jest rozprowadzana zgodnie z rozkładem normalnym, zapewniając stałą intensywność oświetlenia dla komórek przechodzących przez obszar wykrywania lasera. Z drugiej strony układ optyczny składa się z wielu zestawów soczewek, otworów i filtrów, które można podzielić na dwie grupy: przed i za komorą przepływową.
Układ optyczny przed komorą przepływową składa się z soczewki i otworu. Główną funkcją soczewki i otworu (zwykle dwóch soczewek i otworu) jest skupienie wiązki laserowej o przekroju kołowym emitowanej przez źródło laserowe w wiązkę eliptyczną o mniejszym przekroju. Rozprowadza to energię lasera zgodnie z rozkładem normalnym, zapewniając stałą intensywność oświetlenia dla komórek w całym obszarze wykrywania lasera i minimalizując zakłócenia ze strony światła rozproszonego.
Istnieją trzy główne typy filtrów:
1: Filtr długoprzepustowy (LPF) – przepuszcza wyłącznie światło o długościach fal dłuższych od określonej wartości.
2: Filtr krótkoprzepustowy (SPF) – przepuszcza wyłącznie światło o długościach fal poniżej określonej wartości.
3: Filtr pasmowy (BPF) – przepuszcza tylko światło o określonym zakresie długości fal.
Różne kombinacje filtrów mogą kierować sygnały fluorescencji o różnych długościach fal do poszczególnych fotopowielaczy (PMT). Na przykład filtry do wykrywania zielonej fluorescencji (FITC) przed PMT to LPF550 i BPF525. Filtry używane do wykrywania pomarańczowo-czerwonej fluorescencji (PE) przed PMT to LPF600 i BPF575. Filtry do wykrywania czerwonej fluorescencji (CY5) przed PMT to LPF650 i BPF675.
Cytometria przepływowa jest głównie stosowana do sortowania komórek. Wraz z rozwojem technologii komputerowej, rozwojem immunologii i wynalezieniem technologii przeciwciał monoklonalnych, jej zastosowania w biologii, medycynie, farmacji i innych dziedzinach stają się coraz bardziej powszechne. Zastosowania te obejmują analizę dynamiki komórek, apoptozę komórek, typizację komórek, diagnostykę nowotworów, analizę skuteczności leków itp.
Czas publikacji: 21-09-2023
