(Cytometria przepływowa, FCM) to analizator komórek, który mierzy intensywność fluorescencji wybarwionych markerów komórkowych. Jest to zaawansowana technologia opracowana w oparciu o analizę i sortowanie pojedynczych komórek. Może szybko mierzyć i klasyfikować wielkość, strukturę wewnętrzną, DNA, RNA, białka, antygeny i inne właściwości fizyczne lub chemiczne komórek i może opierać się na zbiorze tych klasyfikacji.
Cytometr przepływowy składa się głównie z pięciu następujących części:
1 Komora przepływowa i układ przepływowy
2 Laserowe źródło światła i system kształtowania wiązki
3 Układ optyczny
4 Elektronika, system przechowywania, wyświetlania i analizy
5 System sortowania komórek
Wśród nich głównym pomiarem sygnałów fluorescencji w cytometrii przepływowej jest wzbudzenie lasera w źródle światła laserowego i układzie formowania wiązki. Intensywność światła wzbudzającego i czas ekspozycji są powiązane z intensywnością sygnału fluorescencji. Laser to spójne źródło światła, które może zapewnić oświetlenie o pojedynczej długości fali, dużej intensywności i wysokiej stabilności. Jest to idealne źródło światła wzbudzającego, spełniające te wymagania.
Pomiędzy źródłem lasera a komorą przepływową znajdują się dwie cylindryczne soczewki. Soczewki te skupiają wiązkę lasera o przekroju kołowym emitowaną ze źródła lasera w wiązkę eliptyczną o mniejszym przekroju (22 μm × 66 μm). Energia lasera w tej eliptycznej wiązce rozkłada się zgodnie z rozkładem normalnym, zapewniając stałą intensywność oświetlenia dla komórek przechodzących przez obszar detekcji lasera. Z drugiej strony układ optyczny składa się z wielu zestawów soczewek, otworków i filtrów, które można z grubsza podzielić na dwie grupy: przed i za komorą przepływową.
Układ optyczny znajdujący się przed komorą przepływową składa się z soczewki i otworka. Główną funkcją soczewki i otworka (zwykle dwie soczewki i dziurka) jest skupienie wiązki lasera o przekroju kołowym emitowanej przez źródło lasera w wiązkę eliptyczną o mniejszym przekroju. Rozdziela to energię lasera zgodnie z rozkładem normalnym, zapewniając stałą intensywność oświetlenia komórek w całym obszarze detekcji lasera i minimalizując zakłócenia powodowane przez światło rozproszone.
Istnieją trzy główne typy filtrów:
1: Filtr długoprzepustowy (LPF) – przepuszcza tylko światło o długości fal większej niż określona wartość.
2: Filtr krótkoprzepustowy (SPF) – przepuszcza tylko światło o długości fal poniżej określonej wartości.
3: Filtr pasmowy (BPF) – przepuszcza jedynie światło o określonym zakresie długości fal.
Różne kombinacje filtrów mogą kierować sygnały fluorescencji o różnych długościach fal do poszczególnych fotopowielaczy (PMT). Na przykład filtry do wykrywania zielonej fluorescencji (FITC) przed PMT to LPF550 i BPF525. Filtry stosowane do wykrywania pomarańczowo-czerwonej fluorescencji (PE) przed PMT to LPF600 i BPF575. Filtry do wykrywania czerwonej fluorescencji (CY5) przed PMT to LPF650 i BPF675.
Cytometria przepływowa jest stosowana głównie do sortowania komórek. Wraz z postępem technologii komputerowej, rozwojem immunologii i wynalezieniem technologii przeciwciał monoklonalnych, ich zastosowania w biologii, medycynie, farmacji i innych dziedzinach stają się coraz bardziej powszechne. Zastosowania te obejmują analizę dynamiki komórek, apoptozę komórek, typowanie komórek, diagnostykę nowotworów, analizę skuteczności leków itp.
Czas publikacji: 21 września 2023 r
