(Cytometria przepływowa, FCM) to analizator komórkowy, który mierzy intensywność fluorescencji zabarwionych markerów komórek. Jest to technologia zaawansowanych technologii opracowana na podstawie analizy i sortowania pojedynczych komórek. Może szybko mierzyć i klasyfikować wielkość, strukturę wewnętrzną, DNA, RNA, białka, antygeny i inne właściwości fizyczne lub chemiczne komórek i może opierać się na zbieraniu tych klasyfikacji.
Cytometr przepływowy składa się głównie z następujących pięciu części:
1 komora przepływowa i system fluidics
2 źródło światła laserowego i system kształtowania wiązki
3 System optyczny
4 System elektroniki, przechowywania, wyświetlania i analizy
5 System sortowania komórek
Wśród nich wzbudzenie laserowe w źródle światła laserowego i systemie tworzenia wiązki jest głównym pomiarem sygnałów fluorescencyjnych w cytometrii przepływowej. Intensywność światła wzbudzenia i czas ekspozycji są związane z intensywnością sygnału fluorescencyjnego. Laser jest spójnym źródłem światła, które może zapewnić oświetlenie o jednej długości fali, wysokiej intensywności i wysokiej stabilności. Jest to idealne źródło światła wzbudzenia, aby spełnić te wymagania.
Istnieją dwie cylindryczne soczewki między źródłem lasera a komorą przepływu. Te soczewki koncentrują się na wiązce laserowej z okrągłym przekrojem emitowanym ze źródła lasera do belki eliptycznej o mniejszym przekroju (22 μm × 66 μm). Energia laserowa w tej eliptycznej wiązce jest rozkładana zgodnie z rozkładem normalnym, zapewniając spójną intensywność oświetlenia dla komórek przechodzących przez obszar wykrywania lasera. Z drugiej strony system optyczny składa się z wielu zestawów soczewek, otworów i filtrów, które można z grubsza podzielić na dwie grupy: w górę i poniżej komory przepływowej.
Układ optyczny przed komorą przepływu składa się z soczewki i otworów. Główną funkcją soczewki i dziury (zwykle dwóch obiektywów i otworów) jest skupienie wiązki laserowej z okrągłym przekrojem emitowanym przez źródło lasera w wiązkę eliptyczną o mniejszym przekroju. Rozdziela to energię laserową zgodnie z rozkładem normalnym, zapewniając spójną intensywność oświetlenia dla komórek w obszarze wykrywania lasera i minimalizując zakłócenia z rozbieżnego światła.
Istnieją trzy główne typy filtrów:
1: Filtr Long Pass (LPF) - umożliwia tylko światło o długościach fali wyższych niż określona wartość do przejścia.
2: Filtr krótkiego pasa (SPF) - umożliwia tylko światło o długościach fal poniżej określonej wartości do przejścia.
3: Filtr pasmpass (BPF) - Umożliwia przechodzenie przez światło tylko w określonym zakresie długości fali.
Różne kombinacje filtrów mogą kierować sygnałami fluorescencyjnymi o różnych długościach fal do poszczególnych rur fotoptomultiplierskich (PMT). Na przykład filtry do wykrywania zielonej fluorescencji (FITC) przed PMT są LPF550 i BPF525. Filtry stosowane do wykrywania fluorescencji pomarańczowo-czerwonej (PE) przed PMT są LPF600 i BPF575. Filtry do wykrywania czerwonej fluorescencji (Cy5) przed PMT to LPF650 i BPF675.
Cytometria przepływowa jest używana głównie do sortowania komórek. Wraz z postępem technologii komputerowej opracowanie immunologii i wynalezienie technologii przeciwciał monoklonalnych, jej zastosowania w biologii, medycynie, aptece i innych dziedzinach stają się coraz bardziej rozpowszechnione. Zastosowania te obejmują analizę dynamiki komórek, apoptozę komórek, pisanie komórek, diagnozę nowotworu, analizę skuteczności leku itp.
Czas po: 21-2023 września
